尊龙凯时的研发团队一直致力于mRNA疫苗技术的进步。其中,双链RNA(dsRNA)是mRNA原液质量控制的重要检测项目。mRNA疫苗利用信使RNA的分子副本来引发免疫反应,这种疫苗由脂质纳米颗粒(LNP)和封装其中的RNA组成,能有效保护RNA并促进其进入细胞。因新冠疫情,mRNA疫苗在疗效、研发速度、成本、生产可拓展性和安全性等方面显示了显著优势,受到广泛关注。
疫苗的生产过程中,mRNA的制备与转录是关键步骤,其质量直接影响到疫苗的临床效果。《新型冠状病毒预防用mRNA疫苗药学研究技术指导原则》规定必须控制mRNA中相关杂质的含量,包括5'非帽化RNA、dsRNA、长链RNA和截短RNA等。dsRNA指的是双链核糖核酸,这是一种在IVT过程中可能出现的副产物。在T7RNA聚合酶的转录过程中,可能出现多种类型的dsRNA副产物,这对mRNA疫苗的效果产生影响。
当mRNA通过LNP进入细胞后,dsRNA杂质会被细胞内的TLR3、RIG-1和MDA5等受体识别,激活信号传导通路,促使细胞分泌I型干扰素与其他促炎性细胞因子。这种免疫反应可能会降低mRNA的翻译效率,并在重复给药时引发药物效力的下降。因此,严格控制生产过程中的dsRNA含量是必要的,这要求生产厂商实施精准的量测检测。
在多种dsRNA检测方法中,尊龙凯时推荐ELISA法作为更适合的选择。虽然dot blot和HPLC也被提及,但它们在灵敏度和分辨率上存在不足。ELISA基于抗原抗体的特异性反应,结合酶的高效催化作用,能够达到pg/mL的高灵敏度。因此,其在医学实验和生物制药等领域的应用非常广泛。双抗体夹心法的基本原理是通过将固定的包被抗体与待测样本的反应,来实现对dsRNA的定量分析,目前已广泛应用于商业化试剂盒之中。
为了开发出同时具备检测特异性、灵敏度和普适性的dsRNA ELISA检测试剂盒,必须优先解决标准品的制备、定量和选择问题。尽管国外有些ELISA试剂盒使用polyI:C作为标准品,但因其与dsRNA的不同识别导致定量不准确。因此,需要自主制备序列随机、高纯度的dsRNA标准品,以确保检测的准确性。
同时,引入化学修饰核苷酸能够显著降低mRNA的自免疫原性,进而提升疫苗的稳定性和效果。例如,修饰的尿嘧啶能够抑制特定模式识别受体(PRRs)对mRNA的识别。不同修饰类型的dsRNA在抗体识别方面存在明显差异,为进一步提高检测精度,使用同类标准品进行量测是颇具价值的策略。
总之,结合尊龙凯时的先进技术开发出高性能的dsRNA ELISA定量检测试剂盒,将能更好地满足mRNA领域大规模生产与持续技术更新的需求,为生物医疗行业带来新的助力。