尊龙凯时细胞培养指南：A549细胞系的培养条件

培养条件

气相要求为95%空气和5%二氧化碳，温度保持在37℃。培养基为F12K，加入10%胎牛血清（FBS）和1%青霉素/链霉素（P/S）。

细胞系来源

A549细胞系由DJGriad根据一名58岁白人男性肺癌患者的组织样本开发而来，其具有合成高含量不饱和脂肪酸卵磷脂的能力。

传代方法

建议首次传代时采用1:2的比例，若细胞密度超过80%，即可进行传代。更换培养液的频率为每两天一次。

细胞处理与观察

收到细胞后，应使用75%酒精喷洒整个细胞瓶以进行消毒。在超净台进行无菌操作，将细胞瓶放入37℃，5% CO2的培养箱中静置3-4小时以稳定细胞状态。对细胞进行显微镜观察，并在不同倍数下拍照保存，最好涵盖40x、100x及200x的放大倍率。前三天的照片作为售后依据，不提供照片将默认收到了良好状态的细胞。

细胞培养步骤

传代时，若细胞汇合度未超过80%，可将完全培养液收集至离心管中，保留5ml，将其放入37℃、5% CO2培养箱中。如细胞密度超过80%，则可直接进行传代。

贴壁细胞传代步骤

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁的PBS洗涤细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，37℃培养1-2分钟，观察细胞变圆脱落后，加入5ml完全培养基终止消化。
3. 轻轻吹打细胞以确保完全脱落，吸出悬液，转移至15ml离心管中，1000rpm离心5分钟，弃去上清，加入1-2ml完全培养基重悬。
4. 按1:2比例进行分瓶传代，补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，然后放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中培养。

悬浮细胞传代步骤

1. 使用半换液法，竖着放置培养瓶，静置1小时，吸掉3ml培养基，补给3ml完全培养基。
2. 如需分瓶，收集细胞悬液至离心管，1000rpm离心5分钟，弃去上清，再补加1-2ml培养液重新悬浮并分瓶。

细胞冻存与复苏

细胞生长至覆盖培养管的80%时，将培养液弃去，用PBS洗涤一次。添加0.25%胰蛋白酶约1ml，轻轻观察，待细胞回缩变圆后加入完全培养基终止消化。将细胞悬液转移至离心管，1000rpm离心5分钟，弃去上清并加入1ml无血清冻存液，混匀后移入冻存管中。最后将冻存管放入-80℃冰箱储存，24小时后可转入液氮罐。

注意事项

在运输过程中，可能会有部分细胞脱落，属于正常现象。如脱落过多，可收集上清液进行过渡培养并处理。确保遵循上述步骤操作，以保持细胞的活性和培养质量。

优化的步骤和细致的注意事项确保了在尊龙凯时的细胞培养过程中，能够有效地管理并提高细胞活性，为后续实验打下坚实基础。