**培养条件**：在收到细胞后，处理到良好状态后，应及时灌满完全培养液并封好瓶口，这是运输细胞的最佳方式。在开瓶之前，请仔细核对培养瓶上标注的细胞名称是否与订购的名称一致，检查是否存在瓶体破损或漏液等异常情况。如果没有发现任何异样，包括漏液或污染等，需在显微镜下观察细胞的生长情况，并拍摄不同倍数的照片（最佳选择为40x、100x和200x各一张）进行保存。前三天的照片是重要的售后依据，如未提供照片则默认状态良好。

**贴壁细胞传代步骤**如下：

1. 弃去培养上清液，用不含钙、镁离子的PBS对细胞进行1-2次冲洗。

2. 向培养瓶中加入约1-2ml的0.25%胰蛋白酶消化液，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，期间在显微镜下观察细胞的消化情况。如果大部分细胞变圆并脱落，需迅速将培养瓶取回操作台，轻敲瓶底后加入超过5ml的完全培养基以终止消化过程。

3. 轻轻吹打细胞以确保其完全脱落后，吸出培养液，将其转移至15ml的离心管中，以1000RPM的速度离心5分钟，弃去上清液，并补充1-2ml完全培养基以重悬细胞。

4. 按1:2的比例将细胞悬液分瓶（分别输入两个T25瓶中），再补充新的完全培养基至每瓶5-8ml，最后放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中培养。

**悬浮细胞传代步骤**如下：

1. 采用半换液法，竖直放置培养瓶于培养箱中静置约1小时，轻轻吸掉约3ml培养基，然后补充3ml完整培养基。如果培养基变色缓慢，可以直接加500ul左右的FBS，传代时可直接补加5ml培养基，通常经过3次半换液处理后，可以进行一次离心传代以清除死细胞。

2. 使用离心换液法时，若需分瓶，则将细胞悬液收集至离心管中，以1000RPM离心5分钟，弃去上清液，补加1-2ml培养液后重悬均匀，将细胞悬液按1:2的比例分至新的T25瓶中，并添加6-8ml按照说明书配置的新完全培养基，以保持细胞的生长活力，后续传代可根据实际情况按1:2至1:5的比例进行。

**细胞冻存**：

1. 当细胞生长至覆盖培养瓶80%面积时，弃去T25培养瓶中的培养液，使用PBS清洗一次。

2. 向培养瓶中加入约1ml的0.25%胰蛋白酶消化液，观察细胞状态，待细胞回缩变圆后加入5ml的完全培养液以终止消化，轻轻吹打细胞使之脱落。将悬液转移至15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。

3. 弃去上清液，加入1ml的雅吉生物无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转入冻存管。

4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱中保存，如需转入液氮罐保存，则需在-80℃冰箱中至少存放24小时后再进行转移。

**注意事项**：在运输过程中，有些细胞较为松动，容易脱落，这是正常现象。如有较多细胞脱落，需将培养瓶内所有培养液收集至离心管，1000RPM离心5分钟，收集上清作过渡培养，沉淀后加入1-2ml胰酶，轻轻吹打后重悬，消化1-2分钟后加入5ml完全培养基终止反应。再次离心，去上清，加入1-2ml完全培养基重悬，按1:2的比例分瓶传代（两个T25瓶），并补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5% CO2细胞培养箱中培养。

**关于细胞问题的重发情况**：

1. 如果细胞在运输过程中发生问题，如丢失、瓶体破损、培养液严重漏液等，则可申请重发；

2. 若收到细胞后48小时内发现污染问题，请提供真实的实验结果，经核实后可进行重发；

3. 常温发货的细胞静置24小时后，干冰运输的细胞复苏24小时后，如绝大多数细胞未存活（需提供清晰的细胞状态照片），则可重发；

4. 如干冰冻存发货的细胞在复苏24小时后或常温细胞静置4小时且未开封后发现污染，则可重发；

5. 如细胞活性存在问题，请在收到产品7天内提供真实的实验结果，使用台盼蓝染色法鉴别细胞活力，验证后可重发；

6. 在收到细胞当天及第2、3天内请进行拍照，未在3天内告知的视为产品合格。

如在4-7天内发现问题，并能提供收到细胞前3天的照片及出现问题时的照片以及细胞操作的详细步骤，经过技术人员确认责任后，可重发。如技术人员判定责任为双方共同承担，则由双方协商处理，或按合同价的50%收取重发费用。

**不予重发的情况**：

1. 客户造成的细胞污染将不予重发；

2. 因客户不当操作导致细胞状态不良的将不予重发；

3. 使用非本库推荐的细胞培养体系造成的问题不予重发；

4. 未能提供细胞培养前3天照片的，将不予重发；

5. 经其他处理后细胞状态不佳的，将不予重发；

6. 收到细胞后2天内未告知的，将不予重发；

7. 具体情况视情况而定。

通过遵循以上步骤和注意事项，可以有效提升细胞培养的成功率和活性，彰显**尊龙凯时**在细胞培养领域的专业性和可靠性。